Objetivo. Realizar uma revisão sistemática, identificando os estudos experimentais que utilizaram o método de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e a nanotecnologia para desenvolvimento ou aprimoramento de técnicas de diagnóstico da paracoccidioidomicose (PCM). Método. Foram analisados estudos indexados à base de dados MEDLINE, publicados a partir de 2013 e, originalmente, em língua inglesa. Os estudos que fizeram parte do escopo dessa revisão utilizaram PCR, nested e semi nested-PCR, real time-PCR e PCR associado a nanotecnologia como métodos de diagnóstico e diferenciação de espécies do gênero Paracoccidioides. Resultados. Fizeram parte do escopo desta revisão seis estudos, que preencheram os critérios de seleção. Os diagnósticos realizados nos estudos analisados utilizaram cinco diferentes metodologias de PCR, dentre elas nested-PCR, one tube semi nested-PCR (OTsn-PCR), real time-PCR, PCR do polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (PCR-RFLP) e PCR regular. Conclusão. Os métodos moleculares são técnicas rápidas e específicas, permitindo avaliar regiões gênicas e intergênicas importantes. Porém, as técnicas devem ser validadas utilizando-se amostras clínicas, o que se mostrou como um fator preocupante para a utilização das metodologias no diagnóstico da PCM.
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